2-氨基-4-噻唑-乙酸甲酯實(shí)驗(yàn)原理

    62.5mgTS，34.5mgN-羥基琥珀酰亞胺酯和45.3mg 1,3-二環(huán)己基碳二亞胺在1.5ml的干燥的N,N-二甲基酰胺中反應(yīng)18h， 4o C，通過濾過作用移除生成的二環(huán)乙基脲沉淀物，得到濾液。濾液被加到含有65mgLPH 2ml的PBS中，用NaOH調(diào)節(jié)PH到7.6。這個(gè)混合液在4o C，攪拌24h。通過TLC檢測磺胺藥有沒有聚合現(xiàn)象。因?yàn)榈蛪A性自由的氨基磺酸簇（例如，磺胺噻唑pka是2.36），尤其賴氨酸的氨基簇（pka10.28）?？赡苁敲恳环N氨基酸形成酰胺的主要原因。24h后，這個(gè)反應(yīng)混合物被轉(zhuǎn)移到透析液里，透析對(duì)抗1L 8M尿素12h，透析液被移到4L，50mM的碳酸氫氨中，接著移到4L，25mM的碳酸氫氨，每一種透析液至少8h。透析袋中的內(nèi)容物被凍干。TS-bsa使用相同的方法，bsa代替LPH。

2-氨基-4-噻唑-乙酸甲酯的合成：

1. 在冰浴中，將無水硫酸鈉干燥的甲醇100ml，加到一個(gè)250ml的三頸燒瓶。
2. 將鹽酸氣體加到裝有甲醇的燒瓶中，不停攪拌，產(chǎn)生大量氣泡。當(dāng)溶液的質(zhì)量增加大約60g，停止加鹽酸。
3. 將2.1g的2-氨基-4-噻唑乙酸緩慢的加到燒瓶里，除去冰浴，攪拌10分鐘。
4. 燒瓶中的溶液進(jìn)行回流6小時(shí)，此時(shí)為輕微的黃色溶液。
5. 將溶液移入一個(gè)快速蒸發(fā)儀中，加入25ml干燥的甲醇，移除溶劑。
6. 從乙酸乙酯和甲醇中再結(jié)晶出來的固體為合成的固體（熔點(diǎn)為169-171o C），即2-氨基--噻唑乙酸甲酯，淺黃色。
N4-乙?；?N1--磺胺的合成：
1. 將2.65gN-Acetylsulfanilyl chloride（ASC）加到一個(gè)50ml的圓底燒瓶中，在攪拌下，加入5ml干燥的吡啶。
2. 將1.50g的2-氨基-4-噻唑乙酸乙酯緩慢的加入到吡啶溶液中，維持溫度在不超過40 o C。溶液為褐色的，進(jìn)行回流，1.5h，冷卻到室溫。
3. 緩慢攪拌下，加入30ml溫水，用二氯甲烷（3*25）萃取。
4. 二氯甲烷層用硫酸鈉干燥，濾過，同時(shí)大部分溶劑用快速旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀移除。加入大約5g硅膠，移除剩余的溶劑，留下一些淡黃色的粉末。這些粉末經(jīng)過一個(gè)50g的二氧化硅柱（50*2.4），這個(gè)柱子用150ml 1:4的甲醇-氯仿洗脫，.移除這些溶劑，得到N4-乙酰基-N1--磺胺（1.6g，50%產(chǎn)量）。
N-[ 4- Carboxymethy1） -2-thiazolyl]sulfanilamide（TS）的合成：
25ml，2MNAOH溶液加到提純的0.95g N4-乙?；?N1--磺胺中，回流2h，冷卻至室溫后，用6N的鹽酸調(diào)節(jié)PH到4.0。得到的渾濁的溶液用乙酸乙結(jié)合物測定抗原決定簇密度和自由芳香族氨基的存在。