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上海哈靈生物專家對(duì)ELISA試劑盒的評(píng)價(jià)
點(diǎn)擊次數(shù)：1164 更新時(shí)間：2013-07-27
 
上海哈靈生物專家對(duì)ELISA試劑盒的評(píng)價(jià)
 
ELISA試劑盒是一種十分常用的定性定量檢測(cè)方法，人體和動(dòng)物、體外細(xì)胞培養(yǎng)中80％以上蛋白定量都使用其作為檢測(cè)的方法。ELISA試劑盒價(jià)格一般非常昂貴，但各家試劑公司的試劑盒質(zhì)量卻魚龍混雜。ELISA試劑盒既有用于科研的，也有用于臨床診斷的。應(yīng)用于臨床診斷的試劑盒必須通過衛(wèi)生部門的許可，國(guó)家對(duì)用于臨床診斷的試劑盒有相當(dāng)嚴(yán)格的規(guī)定和要求，并制定出了相關(guān)的規(guī)則來(lái)管理試劑盒的質(zhì)量。
 
仔細(xì)閱讀說(shuō)明書，對(duì)說(shuō)明書的內(nèi)容做一個(gè)詳細(xì)的了解。審查內(nèi)容包括：
1. 試劑盒的名稱：ELISA試劑盒名稱一般由“（物種）＋（測(cè)定指標(biāo)）＋酶聯(lián)免疫試劑盒（ELISA）”，物種和測(cè)定指標(biāo)不能混淆，否則買錯(cuò)了就是你的事情；另外有的試劑盒說(shuō)明書試劑盒名稱明顯與寫在試劑盒上的名稱不符，這要引起你的警惕。
2. 用途：應(yīng)用于科研還是臨床診斷，用于臨床診斷的要有衛(wèi)生部的批準(zhǔn)文號(hào)。
3. 測(cè)定原理：現(xiàn)在ELISA試劑盒除了是測(cè)定抗體的以外，一般使用的是雙抗體夾心法，這種方法大多數(shù)用的是增強(qiáng)的雙抗體夾心法，即使用生物素-親和素系統(tǒng)，還有少數(shù)的指標(biāo)可能使用競(jìng)爭(zhēng)法，這類方法適用于半抗原的測(cè)定。具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的多表位蛋白抗原，其雙抗體夾心法中的一個(gè)抗體必須用單抗。當(dāng)然如果兩個(gè)都是單抗（這兩個(gè)單抗針對(duì)不同表位），那么測(cè)定的線性范圍就較寬，試劑盒性能就較好；一個(gè)用單抗，一個(gè)用多抗，測(cè)定的靈敏度會(huì)更高。某些簡(jiǎn)單的化合物用ELISA測(cè)定時(shí)，因?yàn)闆]有兩個(gè)或以上的表位，一般只能作為半抗原，只能用競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定。如果發(fā)現(xiàn)有測(cè)定簡(jiǎn)單化合物（如雌激素、NO、地高辛等）用雙抗體夾心法作測(cè)定原理時(shí)，這個(gè)試劑盒你就要懷疑了。另外還要說(shuō)明一步雙抗體夾心法與兩步雙抗體夾心法的區(qū)別。一步雙抗體夾心法的吸光度-劑量曲線呈鐘形，隨著待則標(biāo)本中抗原濃度的增加而升高至一定程度后，測(cè)定吸光度即隨抗原濃度的增加而開始下降直至不顯色，即所謂的“鉤狀效應(yīng)”（hook eHect），也就是我們?cè)诿庖叱恋碓囼?yàn)中所稱的“帶現(xiàn)象”（zone phenomenon）。所以當(dāng)使用一步雙抗體夾心法時(shí)，樣品濃度太高，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)測(cè)不出來(lái)的現(xiàn)象，此時(shí)要作適當(dāng)?shù)南♂尣拍軠?zhǔn)確測(cè)定。
4. 試劑盒的組成：用雙抗體夾心法作為測(cè)定的方法時(shí)，試劑盒的組成一般包括：已包被單抗的酶標(biāo)板：一塊，有96孔的，也有48孔的，可拆缷，外面有鋁箔袋密封，打開后有干燥劑，實(shí)驗(yàn)時(shí)暫未使用的酶標(biāo)條要連帶干燥劑密封好，放在4℃冰箱中妥善保存。而應(yīng)用于科研的試劑盒，國(guó)家則沒有出臺(tái)相關(guān)的質(zhì)量管理規(guī)定，因此試劑盒質(zhì)量也就無(wú)法保障。在這種情況下，許多劣質(zhì)的試劑盒在市面泛濫，不少同行為此浪費(fèi)了大量的時(shí)間和金錢，卻沒有得到一個(gè)良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。下面給戰(zhàn)友們介紹一下如何判斷試劑盒的質(zhì)量，選購(gòu)好的試劑盒。
 
ELISA質(zhì)量保證是一個(gè)復(fù)雜的過程，許多重要的環(huán)節(jié)都影響到檢測(cè)的質(zhì)量：
一、操作因素對(duì)ELISA結(jié)果的影響
ELISA操作步驟復(fù)雜，操作不當(dāng)會(huì)產(chǎn)生較大的誤差。
產(chǎn)生較大誤差的影響因素有：
1.加樣
2.溫育
3.洗滌
4.顯色
5.比色
二、灰區(qū)的設(shè)置通常情況下，ELISA定性實(shí)驗(yàn)以“陽(yáng)性”和“陰性”來(lái)衡量結(jié)果，兩者間有一條分界線被稱為“陽(yáng)性判斷值”（cut-off value，CO值），這是定性免疫測(cè)定結(jié)果報(bào)告的依據(jù)。
三、標(biāo)本復(fù)查ELISA手工檢測(cè)過程復(fù)雜，影響因素較多，即使室內(nèi)質(zhì)控在控，也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異，因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準(zhǔn)確性的可靠方法，比如對(duì)HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項(xiàng)目的可疑、弱陽(yáng)性標(biāo)本及少見模式的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行復(fù)查。
四、結(jié)果判斷和報(bào)告常用下列幾種方法表示結(jié)果：
1.定性測(cè)定
2.半定量測(cè)定 結(jié)果一般以滴度表示。
3.定量測(cè)定 即用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以量或單位表示。在ELISA定量檢測(cè)中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4.結(jié)果報(bào)告