大鼠C反應(yīng)蛋白ELISA試劑盒操作說明書 檢測(cè)范圍：80μg/ L2400μg/ L 96determinations的 目的 此套件可用于測(cè)定CRP濃度Ratserum，cellculture物上清或其它相關(guān)生物液體 檢測(cè)原理 該試劑盒檢測(cè)樣本中RatCRP水平，用純化RatCRP抗體涂層微孔，使固相抗體，然后addCRP的井，CombinedCRP抗體，HRP標(biāo)記，成為抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后添加TMB底物溶液，在HRP酶催化TMB底物變成藍(lán)色，反應(yīng)終止通過加入的硫酸溶液和顏色的變化是用分光光度法在450nm波長(zhǎng)下測(cè)量的。大鼠CRP的濃度的樣品中，然后由比較OD值樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線。 試劑盒提供的材料 1 洗的解決方案 20ML×1瓶 7 STOPP解決方案 6毫升×1瓶 2 酶標(biāo)試劑 6毫升×1瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)（4800μg/ L） 0.5毫升×1瓶 3 Microelisa stripplate 12well×8strips 9 標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑 1.5毫升×1瓶 4 樣品稀釋液 6毫升×1瓶 10 指令 1 5 顯色溶液A 6毫升×1瓶 11 封板膜 2 6 顯色液B 6毫升×1瓶 12 密封袋 1 標(biāo)本要求 1。 ，盡快標(biāo)本采集后，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)，應(yīng)該是extractas實(shí)驗(yàn)后盡快提取。如果它不能，標(biāo)本可以保存在-20℃保存，避免反復(fù)凍融。 2。無(wú)法檢測(cè)的樣品含NaN3，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 分析過程 1。稀釋和添加樣品：稀釋原始密度標(biāo)準(zhǔn)如下表所示： 2400μg/ L的 5標(biāo)準(zhǔn) 150μL原始密度標(biāo)準(zhǔn)+150微升標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑 1200μg/ L的 4標(biāo)準(zhǔn) 150μL5標(biāo)準(zhǔn)150μL標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑 600μg/ L的 3標(biāo)準(zhǔn) 150μL4標(biāo)準(zhǔn)150μL標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑 300μg/ L的 2標(biāo)準(zhǔn) 150μL+150微升3標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑 150微克/ L 1標(biāo)準(zhǔn) 150μL+150微升2標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑 2。加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）。測(cè)試樣本。加樣品稀釋液40μl的測(cè)試樣品，然后加入待測(cè)樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍），加樣井，不觸及孔壁盡可能輕輕地混合。 3。溫育：閉板后封板膜，在37℃孵育30分鐘。 配液：將30倍（或20倍）洗滌溶液稀釋30倍（或20倍），用蒸餾水和預(yù)定。 5.washing：揭掉封板膜，干discardLiquid，擺動(dòng)，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后排出，重復(fù)5次，拍干。 加酶，每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。 溫育：操作3。 洗滌：操作5。 9。顏色：，每孔加入顯色溶液A的50ul的顯色溶液B，避光保存15分鐘，在37℃ 反應(yīng)10.Stop的：加入終止液，每孔，停止反應(yīng)（黃色的藍(lán)色的顏色變化）。 11.assay：以空白零，讀加終止液后15分鐘內(nèi)，在450nm處的吸光度。 步驟說明 標(biāo)準(zhǔn)，樣品稀釋液 AddStandard，樣品稀釋液，37℃孵育30分鐘。 洗5次，共軛AddHRP的試劑，在37℃孵育30分鐘。 洗5次，加入顯色解決方案A和B，孵育在37℃30分鐘。 AddStopp解決方案 15分鐘內(nèi)，在450nm處的吸光度 計(jì)算 計(jì)算 以水平的標(biāo)準(zhǔn)密度，OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線在坐標(biāo)紙上，找出相應(yīng)的密度，根據(jù)樣品的OD值由采樣曲線，再乘以稀釋倍數(shù)，或計(jì)算直線標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，與標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品的密度，乘以稀釋倍數(shù)，其結(jié)果是樣品的實(shí)際密度。 重要注意事項(xiàng) 1。該試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘，ELISA板涂如果還沒有使用后打開，板應(yīng)裝入密封袋中保存。 2。洗滌緩沖液可能會(huì)有結(jié)晶析出，可被加熱的水，可以在稀的情況下溶解。洗滌時(shí)不影響結(jié)果。 3。加樣品采樣的每一步，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。在5分鐘內(nèi)添加樣品，如果樣品的數(shù)量多，推薦使用排。 4。如果待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD是大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*），請(qǐng)稀釋樣品（n倍），請(qǐng)乘以稀釋倍數(shù)diluenteand。（×N×5）。 5。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6?；灞芄獗４妗?/div> 7。請(qǐng)嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀作為標(biāo)準(zhǔn)。 8。所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 9。不要混用試劑與從其他地段。 儲(chǔ)存與有效期 不要將2-8℃。 2.validity：半年 |
ELISA（酶免）試劑盒
人ELISA試劑盒
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