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冰凍切片組織線粒體膜通道孔(MPTP)熒光檢測試劑盒產(chǎn)品
點擊次數(shù):1029 更新時間:2016-03-15
 

保存方式

 

保存染色液(Reagent B)在-20冰箱里,避免光照;其余的保存在4冰箱里;有效保證6月

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管:用于染色工作液配制和組織細(xì)胞染色的容器

培養(yǎng)箱:用于染色孵育

(共聚焦)熒光顯微鏡:用于組織細(xì)胞熒光分析

 

 

實驗步驟

 

實驗開始前,將-20冰箱里的試劑盒中的染色液(Reagent B)置入冰槽里融化,中和液(Reagent C)放進37恒溫水槽里預(yù)熱。然后移出xx微升染色液(Reagent B)到新的1.5毫升離心管,加入xx微升中和液(Reagent C),混勻后,標(biāo)記為染色工作液,置入暗室里。然后進行下列操作。

  

  • 準(zhǔn)備5片待測的厚為10微米的未經(jīng)固著處理的冰凍切片
  • 置于室溫下,小心加上xx微升預(yù)冷的清理液(Reagent A),鋪滿整個切片表面
  • 小心移去切片上的清理液(Reagent A)
  • 小心加上xx微升室溫預(yù)熱的染色工作液,鋪滿整個切片表面
  • 在37濕潤培養(yǎng)箱里,孵育30至60分鐘(注意:避免液體蒸發(fā)
  • 小心移去切片上的染色工作液,避免光照
  • 小心加上xx微升清理液(Reagent A),鋪滿整個切片表面
  • 小心移去切片上的清理液(Reagent A)
  • 重復(fù)實驗步驟7和8一次
  • 放上蓋玻片或封片
  • 即刻在(共聚焦)熒光顯微鏡下觀察(定性檢測):激發(fā)波長488nm,散發(fā)波長505nm――綠色熒光減弱,表明膜通道孔活性(MPTP)增強

注意事項

 

  • 本產(chǎn)品為50次操作
  • 操作時,避免污染母液
  • 操作時,須戴手套
  • 建議使用新鮮組織(手術(shù)切除后1小時內(nèi))制成的冰凍切片
  • 染色前,所有試劑溶液,除染色液(Reagent B)外,需37℃預(yù)熱
  • 建議組織染色完成后,即刻進行熒光檢測分析 
  • 孵育時,必須避免光照
  • 本產(chǎn)品友好使用于雙重染色或重疊染色
  • 如果不具備505nm散發(fā)波長的濾波器,可以使用505nm至530nm中的任一波長
  • 本公司提供膜通道孔抑制劑: 0.2毫摩爾環(huán)胞素A(cyclosporine A)-12226,維護熒光完整
  • 本公司提供系列線粒體分析試劑產(chǎn)品