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DMEM低糖培養(yǎng)基配制方法
點(diǎn)擊次數(shù):2872 更新時(shí)間:2015-07-01
 

DMEM低糖培養(yǎng)基


DMEM是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養(yǎng)基,DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上研制的。與MEM比較增加了各種成分用量,同時(shí)又分為高糖型(低于4500g/L)和低糖型(低于1000g/L)。高糖型有利于細(xì)胞停泊于一個(gè)位置生長(zhǎng),適于生長(zhǎng)較快、附著較困難腫瘤細(xì)胞等。


優(yōu)勢(shì):

1.溶解使用的是WFI水系統(tǒng),具有*的質(zhì)量

2.在我們標(biāo)準(zhǔn)的500ml及1L包裝瓶中批量大達(dá)2000L

3.在我們的5、10、20、50、100與200L的多種規(guī)格的BPC中批量大達(dá)10000L

4.所有標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)品均為0.1μm過(guò)濾


這種培養(yǎng)基的特點(diǎn):

 (1)氨基酸含量為依格爾培養(yǎng)基的2倍,且含有非必需氨基酸,如甘氨酸等

 (2)維生素含量為依格爾培養(yǎng)基的4倍;

(3)含有糖酵解途徑中的重要物質(zhì)——丙酮酸

 (4)含有微量的鐵離子。 該類培養(yǎng)基廣泛應(yīng)用于疫苗生產(chǎn)和各種初代病毒宿主細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)及單一細(xì)胞培養(yǎng);如A9、3T6、BALB/3T3、COS-1、COS-3、COS-7、L6、WEHI-3b等細(xì)胞系的培養(yǎng)。

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配制方法 :

(1)在一個(gè)盡可能接近總體積的容器中加入比預(yù)期培養(yǎng)基總體積少5%的雙蒸水。

(2)在室溫(20℃到30℃)的水中加入干粉培養(yǎng)基,輕輕攪拌,不要加熱。

(3)水洗包裝袋的內(nèi)部,轉(zhuǎn)移全部的痕量干粉到容器內(nèi)。

(4)加NaHCO3到培養(yǎng)基中。

(5)用雙蒸水稀釋到想要的體積,攪拌溶解。注意不要過(guò)分?jǐn)嚢琛?

(6)通過(guò)緩慢攪拌加入1N NaOH 或1N HCL調(diào)節(jié)pH值,由于pH值在過(guò)濾時(shí)會(huì)上升0.1到0.3,因而調(diào)節(jié)pH值使它比終想要的pH值低0.2到0.3。培養(yǎng)基在過(guò)濾前要保持密封。

配制培養(yǎng)基要注意以下問(wèn)題:

1.認(rèn)真閱讀說(shuō)明書。說(shuō)明書都注明干粉不包含的成分,常見(jiàn)的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等。這些成分有些是必須添加的,如NaHCO3、谷氨酰胺,有些根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要決定。

2.配制是要保證充分溶解,NaHCO3、谷氨酰胺等物質(zhì)都要等培養(yǎng)基*溶解之后

3.配制所用的水應(yīng)是三蒸水,離子濃度很低。

4.所用器皿應(yīng)嚴(yán)格消毒。

5.配制好的培養(yǎng)基應(yīng)馬上過(guò)濾,無(wú)菌保存于4度。

6..液體培養(yǎng)基主要是為了科研工作的方便而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基,它是一種滅菌后保證


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