哈靈生物實(shí)驗(yàn)室——血清常見問(wèn)題及解決

血清是細(xì)胞培養(yǎng)中重要的元素之一。因此，我整理了一些相關(guān)資料，也是實(shí)驗(yàn)室里常會(huì)遇到的問(wèn)題，僅供大家參考：
1、保存血清的方法？
我們建議血清應(yīng)保存在-5C至-2OC。然而，若存放于4C時(shí)，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若您一次無(wú)法用完一瓶，建議您無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。
2、如何解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
我們建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8C冰箱使之溶解，然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是，溶解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。
3、血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理?
血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但普的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血渭解凍后，也會(huì)存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。
若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾。我們不建議您以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞您的過(guò)濾膜。
4.何謂熱滅活?
一般是以56C，30分鐘來(lái)處理已解凍的血清，因?yàn)榇思訜岵襟E，可以使補(bǔ)體去活化，而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有:溶細(xì)胞活性，平滑肌的收縮，肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放，增強(qiáng)吞噬作用，淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的趨化和激活。
5、有必要做熱滅活嗎?
實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)，或*沒有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多，這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察，像是 "小黑點(diǎn)"，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37C環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。
因此我們建議您，若非必須，您可以不需要做熱處理這一步。如此一來(lái)，不但節(jié)省您寶貴的時(shí)間，更確保您血清的質(zhì)量!另外，購(gòu)買已滅活成品也不失一個(gè)捷徑，請(qǐng)?jiān)谫?gòu)買的時(shí)候注意詢問(wèn)廠家是否是已滅活血清。
6、如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
我們建議您在使用血清的時(shí)候，注意下列的操作:
*解凍血清時(shí)，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-2O。C至4。C至室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20。C至37。C)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
*解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生
*請(qǐng)勿將血清置于37。C太久。若在37。C放置太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。
*血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟。
*若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56。C，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多。