HL80162.1 v.A

石蠟切片淀粉樣蛋白（AMYLOID）硫磺素S（thioflavine S）熒光染色試劑盒

產(chǎn)品說明書

主要用途

石蠟切片淀粉樣蛋白（AMYLOID）硫磺素S（thioflavine S）熒光染色試劑是一種旨在使用標(biāo)準(zhǔn)化的化學(xué)分離石蠟方法和硫磺素S染色技術(shù)，與淀粉樣蛋白結(jié)合，來分析存檔中的石蠟包埋的組織切片中蘋果綠熒光現(xiàn)象的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于石蠟包埋組織切片的淀粉樣蛋白檢測(cè)。廣泛用于淀粉樣蛋白樣疾病的病理生理的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，熒光清晰。

技術(shù)背景

淀粉樣蛋白（AMYLOID）是一種同質(zhì)性、嗜伊紅性（eosinophilic）、不溶性的纖維蛋白（fibrous protein）聚合體，具有共同的β交叉折疊層（β sheet）組織結(jié)構(gòu)特征，沉積在細(xì)胞外。蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊（misfolding），且異常自我聚集將導(dǎo)致淀粉樣變性（amyloidosis），細(xì)胞毒纖維沉積，產(chǎn)生組織損傷，進(jìn)而引起23種不同淀粉樣蛋白綜合癥，超過400種疾病，包括阿茨漢姆癥、巴金森氏癥、II型糖尿病、白內(nèi)障、朊病毒疾病等。淀粉樣蛋白斑（amyloid plaque）和神經(jīng)纖維纏結(jié)（neurofibrillary tangles；NFT）是淀粉樣蛋白綜合征的病理性特征。硫磺素S（thioflavine S），苯并噻唑（benzothiazole）衍生物，含有至少6種成分，通過脫氫硫甲苯胺（dehydrothiotoluidine）與磺酸（sulfonic acid）的甲基化而成，是的淀粉樣蛋白熒光探針。一旦與淀粉樣蛋白纖維結(jié)合，在熒光顯微鏡下（激發(fā)波長(zhǎng)470nm，散發(fā)波長(zhǎng)510nm），呈現(xiàn)蘋果綠熒光。

產(chǎn)品內(nèi)容

脫蠟液（Reagent A）                XX毫升

補(bǔ)水液A（Reagent B）          XX毫升

補(bǔ)水液B（Reagent C）          XX毫升

補(bǔ)水液C（Reagent D）          XX毫升

清理液（Reagent E）           XX毫升

氧化液（Reagent F）           XX毫升

去干擾液（Reagent G）          XX毫升

染色液（Reagent H）           XX毫升

強(qiáng)化液（Reagent I）           XX毫升

穩(wěn)定液（Reagent J）           XX毫升

產(chǎn)品說明書                1份

保存方式

保存染色液（Reagent H）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent H），避免光照；有效保證3月

用戶自備

小型染色缸：用于石蠟切片的脫蠟操作

（共聚焦）熒光顯微鏡：用于組織細(xì)胞染色后觀察分析

實(shí)驗(yàn)步驟

一、 脫蠟處理

1． 取出10片待測(cè)的石蠟包埋的組織切片（注意：石蠟包埋前，組織切片須用10％甲醛4℃條件下，固定16小時(shí)，此步很重要）

2． （選擇操作）放進(jìn)80℃烘箱，孵育30分鐘

3． （選擇操作）室溫下靜置15分鐘

4． 按下表依次放進(jìn)小染色缸里孵育

5． 小心移去切片上的補(bǔ)水液C（Reagent D）

6． 小心加上XX微升清理液（Reagent E）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

7． 室溫下孵育5分鐘

8． 小心移去切片上的清理液（Reagent E）

二、樣本染色處理

1． 小心加上XX微升氧化液（Reagent F），鋪滿整個(gè)切片樣品表面

2． 室溫下孵育5分鐘 

3． 小心移去切片上的氧化液（Reagent F）

4． 小心加上XX微升清理液（Reagent E）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

5． 室溫下孵育1分鐘

6． 小心移去切片上的清理液（Reagent E）

7． 小心加上XX微升去干擾液（Reagent G），鋪滿整個(gè)切片樣品表面

8． 室溫下孵育5分鐘 

9． 小心移去切片上的去干擾液（Reagent G）

10． 小心加上XX微升清理液（Reagent E）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

11． 室溫下孵育1分鐘

12． 小心移去切片上的清理液（Reagent E）

13． 小心加上XX微升染色液（Reagent H），鋪滿整個(gè)切片樣品表面

14． 室溫下孵育8分鐘，避免光照

15． 小心移去切片上的染色液（Reagent H）

16． 小心加上XX微升強(qiáng)化液（Reagent I），鋪滿整個(gè)切片樣品表面

17． 室溫下孵育1分鐘 

18． 小心移去切片上的強(qiáng)化液（Reagent I）

19． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟16至18一次

20． 小心加上XX微升清理液（Reagent E）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

21． 室溫下孵育1分鐘

22． 小心移去切片上的清理液（Reagent E）

23． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟20至22二次

24． 小心加上XX微升穩(wěn)定液（Reagent J），鋪滿整個(gè)切片樣品表面

25． 在4℃冰箱里孵育30分鐘 

26． 小心移去切片上的穩(wěn)定液（Reagent J）

27． 小心加上XX微升清理液（Reagent E）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

28． 室溫下孵育1分鐘

29． 小心移去切片上的清理液（Reagent E）

30． 封片

31． 即刻在（共聚焦）熒光顯微鏡下（激發(fā)波長(zhǎng)470nm，散發(fā)波長(zhǎng)510nm）觀察：

淀粉樣蛋白：呈現(xiàn)蘋果綠熒光

注意事項(xiàng)

1． 本產(chǎn)品為50次操作

2． 操作時(shí)，須帶手套

3． 本產(chǎn)品友好使用于雙重染色或重疊染色，即首*行常規(guī)免疫熒光染色，然后進(jìn)行硫磺素S染色

4． 石蠟包埋前，組織切片須用10％甲醛4℃條件下，固定16小時(shí)，否則造成樣品支離破碎

5． 試劑溶液在樣品表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿樣品表面

6． 組織細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行熒光顯微鏡觀察 

7． 用戶可以使用DAPI濾波器波長(zhǎng)進(jìn)行觀察

8． 本公司提供系列淀粉樣蛋白染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰

使用承諾

哈靈生物秉著“信譽(yù)至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾"的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后，應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題，請(qǐng)立即以書面形式（實(shí)驗(yàn)報(bào)告）與本公司聯(lián)系，并將該產(chǎn)品退回，經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致，本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯(cuò)誤操作所致，本公司不承擔(dān)由此造成的損失。