特殊石蠟切片中性脂質尼羅紅直接染色試劑盒產品說明書

主要用途

特殊石蠟切片中性脂質尼羅紅直接染色試劑是一種旨在使用特殊脫蠟處理和高度脂溶性惡嗪類熒光染料尼羅紅染色技術，特異性地使組織細胞內中性脂質顯示金黃色熒光，分析石蠟包埋組織切片中（保留）的中性甘油三脂、脂質以及脂蛋白等脂質狀況的而經典的技術方法。該技術經過精心改良傳統方法、成功實驗證明的。主要適用于各種人體和動物組織石蠟切片的脂質檢測。用于成脂細胞定性、細胞病理學分析（脂質細胞瘤；LIPOID）和識別（脂肪肉瘤；liposarcoma）等研究。產品即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，熒光清晰。

技術背景

脂類物質（LIPIDS）是一類脂溶性（疏水性）的自然分子，分為簡單脂質包括脂肪酸（FATTY ACID）及其衍生物甘油一脂、二脂、三脂；復合脂質包括磷脂、糖脂、硫脂以及脂蛋白；和中性脂質包括甘油、固醇類（STEROL）物質，例如膽固醇。脂類物質在機體中具有能量儲存的作用，是膜結構的組成成分和細胞信號分子。細胞漿脂滴（lipid droplet）的形成是正常細胞生理過程。脂滴由中性脂質構成，通常為甘油三酯，作為脂肪酸能量儲備；或膽固醇酯（cholesteryl ester），作為過多細胞膽固醇的存儲。尼羅紅染色劑（9-diethylamino-5H-benzo[alpha]-phenoxazine-5-one；Nile red）是一種親脂性的惡嗪類熒光染料。與中性脂類物質結合后，在特定激發(fā)波長480nm的激發(fā)下，顯示強金黃色熒光（散發(fā)波長528nm）。 其分子式為C20H18N2O2，分子量為318。由于石蠟包埋的組織切片在去石蠟的過程中，有機溶劑諸如二甲苯等容易破壞和減少組織中的脂質成分，因此使用非二甲苯類脫蠟，以保護組織中的脂質成分是尼羅紅染色的關鍵。

產品內容

脫蠟液（Reagent A）                 50毫升

凈化液（Reagent B）            10毫升

清理液（Reagent C）            50毫升

染色液（Reagent D）           100微升

稀釋液（Reagent E）            10毫升

產品說明書              1份

保存方式

保存染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于反應液配制的容器

恒溫培養(yǎng)箱：用于組織處理孵育

熒光顯微鏡：用于切片染色后觀察分析

實驗步驟

一、 脫蠟處理

1． 取出待測的6微米厚的石蠟包埋的組織切片

2． 放進80℃烘箱，孵育30分鐘

3． 室溫下靜置15分鐘

4． 小心加上500微升脫蠟液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面

5． 室溫下孵育5分鐘

6． 小心移去切片上的脫蠟液（Reagent A）

7． 重復實驗步驟4至6一次

8． 小心加上200微升凈化液（Reagent B）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面

9． 室溫下孵育5分鐘

10． 小心移去切片上的凈化液（Reagent B）

11． 小心加上200微升清理液（Reagent C）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面

12． 室溫下孵育3分鐘

13． 小心移去切片上的清理液（Reagent C）

二、 樣本染色處理

實驗開始前，將試劑盒里的染色液（Reagent D）凍融，然后移出1毫升稀釋液（Reagent E）到1.5毫升離心管，加入10微升染色液（Reagent D），混勻后，置入冰槽里，標記為染色工作液，避免光照。然后進行下列操作。

1． 小心加上200微升染色工作液，鋪滿整個切片樣品表面

2． 室溫下孵育10分鐘，避免光照

3． 放上蓋玻片

4． 即刻在熒光顯微鏡下觀察：激發(fā)波長488nm，散發(fā)波長528nm（中性脂類物質呈現金黃色）

注意事項

1． 本產品為50次操作

2． 建議用戶避免使用常規(guī)石蠟包埋組織切片，即石蠟包埋前避免二甲苯等透明處理

3． 操作時，須戴手套

4． 染色工作液新鮮配制，即刻使用，不宜保存

5． 染色液（Reagent C）的工作液使用比例：1毫升體系可以使用10微升（1：100容量比）

6． 染色時更換試劑溶液時，保持切片面基本晾干

7． 試劑溶液在切片表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿切片表面

8． 整個染色操作，在避光狀態(tài)下進行

9． 染色完成后，即刻進行熒光顯微鏡觀察

10． 本公司提供系列脂類染色試劑產品

質量標準

1． 本產品經鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產品經鑒定熒光清晰