同種異體軟骨細(xì)胞-聚羥基乙酸支架復(fù)合物修復(fù)甲狀軟骨缺損 喬占清1，張 俊1，馬 賽1，馬振亞1，司遠(yuǎn)征1，喬新明2 (1南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校*附屬醫(yī)院耳鼻喉科，河南省南陽(yáng)市 473058；2鄭州大學(xué)基礎(chǔ)學(xué)院，鄭州大學(xué)*附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科，河南省鄭州市 450001) 引用本文：?jiǎn)陶记?，張俊，馬賽，馬振亞，司遠(yuǎn)征，喬新明. 同種異體軟骨細(xì)胞-聚羥基乙酸支架復(fù)合物修復(fù)甲狀軟骨缺損[J].中國(guó)組織工程研究，2016，20(12):1711-1717. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.12.006 ORCID: 0000-0001-7948-8704(喬占清) 文章快速閱讀： 文題釋義： 軟骨組織工程：是將軟骨種子種植于可生物降解、組織相容性好的生物材料上，形成復(fù)合物，然后再把該復(fù)合物植入軟骨缺損處，在生物材料自行降解的過(guò)程中，種植的細(xì)胞形成新的軟骨來(lái)填充缺損。 自體軟骨移植：Donald等采用異體軟骨移植的方式對(duì)不同類(lèi)型軟骨缺損進(jìn)行治療，并與自體軟骨缺損的臨床效果進(jìn)行比較。通過(guò)比較發(fā)現(xiàn)，兩種不同的軟骨移植方式在排斥率和感染率方面經(jīng)比較差異均無(wú)顯著性意義。但較之自體軟骨移植，異體軟骨移植存在明顯吸收現(xiàn)象。學(xué)者們還認(rèn)為，如果在臨床治療中利用良好的方法對(duì)異體軟骨予以妥善保存，則可顯著降低其移植后的吸收現(xiàn)象，達(dá)到與自體軟骨移植相同的治療效果。 異體軟骨移植：鄭信民等通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，利用具有良好活力的同種異體軟骨進(jìn)行軟骨修復(fù)治療可以獲得理想的臨床效果。在將同種異體軟骨植入人體之后，可以維持20年左右的存活時(shí)間且很少會(huì)出現(xiàn)明顯的吸收現(xiàn)象，臨床修復(fù)效果十分理想。 摘要 背景：將聚羥基乙酸支架與軟骨細(xì)胞復(fù)合，可獲得組織工程人工骨。 目的：觀察同種異體軟骨細(xì)胞-聚羥基乙酸支架復(fù)合物修復(fù)乳兔喉甲狀軟骨缺損的效果。 方法：取新西蘭成年大白兔20只，構(gòu)建喉甲狀軟骨缺損模型后隨機(jī)分組，實(shí)驗(yàn)組于缺損處植入同種異體軟骨細(xì)胞-聚羥基乙酸支架復(fù)合物，對(duì)照組于缺損處植入聚羥基乙酸支架。植入后4，8周進(jìn)行大體觀察、組織學(xué)觀察。 結(jié)果與結(jié)論：①大體觀察結(jié)果：植入后4周，實(shí)驗(yàn)組軟骨缺損得到一定的修復(fù)，修復(fù)區(qū)域未出現(xiàn)壞死；對(duì)照組缺損區(qū)域填充有肌肉和結(jié)締組織。植入后8周，實(shí)驗(yàn)組軟骨缺損得到進(jìn)一步修復(fù)，修復(fù)界限不明顯；對(duì)照組軟骨缺損未得到修復(fù)，與周?chē)＼浌侵g存在明顯界限。②免疫組織化學(xué)染色結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組植入后4，8周的Ⅱ型膠原表達(dá)均高于對(duì)照組(P < 0.05)。結(jié)果表明同種異體軟骨細(xì)胞-聚羥基乙酸支架復(fù)合物可促進(jìn)乳兔喉甲狀軟骨缺損的修復(fù)。 關(guān)鍵詞： 生物材料；軟骨生物材料；喉甲狀軟骨；軟骨缺損；同種異體軟骨細(xì)胞；聚羥基乙酸 主題詞： 甲狀軟骨；軟骨細(xì)胞；組織工程 Allogenic chondrocytes-polyglycolic acid compound for repair of thyroid cartilage defects Qiao Zhan-qing1, Zhang Jun1, Ma Sai1, Ma Zhen-ya1, Si Yuan-zheng1, Qiao Xin-ming2 (1Department of Otolaryngology, First Affiliated Hospital of Nanyang Medical College, Nanyang 473058, Henan Province, China; 2Basic School of Zhengzhou University, Department of Otolaryngology, First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450001, Henan Province, China) Abstract BACKGROUND: Tissue-engineered bone can be obtained by the combination of chondrocytes and polyglycolic acid scaffold. OBJECTIVE: To investigate the effect of allogeneic chondrocytes/polyglycolic acid scaffold compound in the repair of thyroid cartilage defects in rabbits. METHODS: Twenty New Zealand adult rabbits were randomly divided into experimental group with implantation of allogeneic chondrocytes/polyglycolic acid scaffold compound and control group with implantation of polyglycolic acid scaffold. Gross and histological observations were done at 4 and 8 weeks after implantation. RESULTS AND CONCLUSION: (1) Gross observation results: 4 weeks after surgery, cartilage defects in the experimental group were repaired certainly, and no necrosis appeared in the repair area; in the control group, the defects were filled with muscle and connective tissues. At 8 weeks after implantation, cartilage defects in the experimental group were further repaired, with unclear repair boundaries, and in the control group, cartilage defects were no repaired and showed a notable boundary with the surrounding normal cartilage tissues. (2) Immunohistochemical staining results: the expression of type II collagen in the experimental group was higher than that in the control group (P < 0.05) at 4 and 8 weeks after implantation. These findings indicate that the allogeneic chondrocytes/polyglycolic acid scaffold compound can promote the repair of thyroid cartilage defects in rabbits. Subject headings: Thyroid Cartilage; Chondrocytes; Tissue Engineering Cite this article: Qiao ZQ, Zhang J, Ma S, Ma ZY, Si YZ, Qiao XM. Allogenic chondrocytes-polyglycolic acid compound for repair of thyroid cartilage defects. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2016;20(12):1711-1717. 0 引言 Introduction 喉是人體中一個(gè)十分重要的部位且結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜，包含多種軟骨類(lèi)型，包括環(huán)狀軟骨、會(huì)厭軟骨、甲狀軟骨和杓狀軟骨等[1]。這些軟骨一同聚集在小小的咽喉通道之中，對(duì)喉腔的正常力學(xué)狀態(tài)予以支撐和維持。但受到疾病及外傷等諸多因素的影響，極易導(dǎo)致喉部軟骨缺損的出現(xiàn)[2]，對(duì)患者的外觀產(chǎn)生一定的影響，引起失音及嗅覺(jué)變化等一系列問(wèn)題[3]。以往修復(fù)喉甲狀軟骨缺損時(shí)，可采用患者自體軟骨移植方式[4]。Bhavana等[5]曾經(jīng)利用髂嵴作為移植物，治療喉氣管軟骨缺損，以實(shí)現(xiàn)聲門(mén)下喉重建。但患者自體軟骨來(lái)源十分有限，且在移植時(shí)不可避免地會(huì)對(duì)患者造成新的創(chuàng)傷，導(dǎo)致各種術(shù)后并發(fā)癥的出現(xiàn)，影響患者術(shù)后恢復(fù)[6]。 隨著臨床醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，組織工程學(xué)得到了較快發(fā)展，組織工程人工骨的出現(xiàn)也為各種喉軟骨損傷治療提供了新的方法。在進(jìn)行修復(fù)時(shí)，需要結(jié)合不同患者軟骨缺損的具體情況進(jìn)行組織人工骨構(gòu)建。構(gòu)建過(guò)程中需要具備種子細(xì)胞和理想的支架材料[7]。受到喉軟骨中空不規(guī)則結(jié)構(gòu)的影響，需要使用良好的細(xì)胞外基質(zhì)支架材料，相應(yīng)的材料應(yīng)該具備良好的機(jī)械強(qiáng)度、孔隙結(jié)構(gòu)及生物相容性等[8]。 現(xiàn)如今，軟骨組織工程細(xì)胞外基質(zhì)材料主要包括天然生物材料和各種人工合成生物材料等。其中聚羥基乙酸是一種常用的人工合成生物材料，具有良好的生物相容性和孔隙結(jié)構(gòu)，是一種理想的支架材料[9]，將其與軟骨細(xì)胞進(jìn)行復(fù)合，可以獲得修復(fù)所需的人工骨。此次實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，從具有免疫力的乳兔體內(nèi)獲得軟骨細(xì)胞，并與聚羥基乙酸進(jìn)行復(fù)合，獲得軟骨修復(fù)復(fù)合物，對(duì)喉甲狀軟骨缺損動(dòng)物進(jìn)行軟骨修復(fù)治療，以探討同種異體軟骨細(xì)胞-聚羥基乙酸復(fù)合物對(duì)有免疫力乳兔體內(nèi)喉甲狀軟骨缺損的修復(fù)效果。 1 材料和方法 Materials and methods 1.1 設(shè)計(jì) 隨機(jī)對(duì)照動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。 1.2 時(shí)間及地點(diǎn) 實(shí)驗(yàn)于2015年7至8月在南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校*附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室完成。 1.3 材料 聚羥基乙酸支架材料由廣州市濟(jì)源生物科技有限公司提供，原材料為聚乙醇酸，可降解，具有良好的生物相容性。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：1周齡純種新西蘭健康乳兔21只，由西安市迪樂(lè)普生物資源開(kāi)發(fā)有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK(陜)2013-0006，健康狀況良好。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)動(dòng)物處置符合動(dòng)物倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。 試劑與儀器： 1.4 實(shí)驗(yàn)方法 乳兔軟骨細(xì)胞的分離和培養(yǎng)[10]：取1只乳兔脫頸處死，在超凈工作臺(tái)上于無(wú)菌環(huán)境下切下雙膝，放入含雙抗的PBS內(nèi)。利用眼科剪游離軟骨予，之后添加胰蛋白酶。消化結(jié)束之后，添加含雙抗和胎牛血清的培養(yǎng)基終止消化。利用眼科將軟骨剪為小碎塊，添加Ⅱ型膠原酶，置于恒溫箱進(jìn)行消化，獲得細(xì)胞懸液。利用150目網(wǎng)篩進(jìn)行過(guò)濾，將過(guò)濾液置于離心管中進(jìn)行離心，離心結(jié)束棄掉上清，添加含雙抗和胎牛血清的培養(yǎng)基，進(jìn)行機(jī)械吹打，之后接種于培養(yǎng)瓶中，進(jìn)行培原代和傳代培養(yǎng)。取第4代細(xì)胞，利用胰蛋白酶進(jìn)行消化之后接種在96孔板中，連續(xù)培養(yǎng)10 d，添加MTT液進(jìn)行孵育，添加DMSO溶解結(jié)晶物，利用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀對(duì)細(xì)胞在492 nm處的吸光度值進(jìn)行檢測(cè)和記錄，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果并繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)。 聚羥基乙酸支架材料處理：對(duì)聚羥基乙酸支架材料進(jìn)行剪裁，剪為片狀，大小為1.2 cm×1.5 cm。利用多聚賴(lài)氨酸對(duì)材料進(jìn)行浸泡，待材料*浸透之后取出，置于自然條件下進(jìn)行風(fēng)干。干燥之后利用乙醇浸泡消毒，并使用三蒸水清洗。清洗結(jié)束后置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中自然干燥，妥善保存?zhèn)溆茫⑷〔糠植牧线M(jìn)行掃描電鏡觀察。 軟骨細(xì)胞復(fù)合聚羥基乙酸支架材料：復(fù)合之前利用紫外線(xiàn)對(duì)支架材料進(jìn)行照射，之后對(duì)軟骨細(xì)胞進(jìn)重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度為6×1010 L-1。將軟骨細(xì)胞接種在支架材料上，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 h。之后添加Ham-F12培養(yǎng)液，培養(yǎng)48 h之后換液。 實(shí)驗(yàn)分組：取20只乳兔，隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組10只。兩組均構(gòu)建喉甲狀軟骨缺損模型，具體方法為：利用戊巴比妥對(duì)動(dòng)物進(jìn)行全麻，把動(dòng)物固定在手術(shù)臺(tái)，對(duì)動(dòng)物頸部進(jìn)行脫毛和術(shù)區(qū)消毒，于動(dòng)物頸部正中做切口，對(duì)肌層進(jìn)行分離，暴露甲狀軟骨，從兩側(cè)甲狀軟骨板交界位置將軟骨切開(kāi)，在一側(cè)甲狀骨板上造成0.6 cm×0.5 cm的缺損，連同內(nèi)外軟骨膜一并去除，保留喉黏膜，制備單側(cè)甲狀骨板缺損模型。單側(cè)甲狀骨板缺損模型制備完畢之后，實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物植入同種異體軟骨細(xì)胞復(fù)合聚羥基乙酸支架材料，對(duì)照組植入同樣大小的聚羥基乙酸材料。植入結(jié)束后進(jìn)行切口縫合。 術(shù)后處理：術(shù)后對(duì)兩組動(dòng)物予以耳緣青霉素靜脈注射80×104 U，待動(dòng)物清醒之后，對(duì)動(dòng)物進(jìn)行常規(guī)喂食、喂水。術(shù)后每天對(duì)兩組動(dòng)物肌肉注射青霉素80×104 U，連續(xù)注射3 d，術(shù)后觀察動(dòng)物一般情況，并進(jìn)行記錄。 1.5 主要觀察指標(biāo) 植入后4周和8周，分別處死兩組動(dòng)物各5只，獲得標(biāo)本進(jìn)行觀察，了解喉甲狀軟骨缺損大體情況。利用Ⅱ型膠原免疫組化試劑盒對(duì)兩組Ⅱ型膠原表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，觀察兩組的Ⅱ型膠原表達(dá)陽(yáng)性率，利用圖像分析軟件進(jìn)行半定量分析。 1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)均利用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 19.0進(jìn)行分析，P < 0.05表示數(shù)據(jù)間差異有顯著性意義。 2 結(jié)果 Results 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量分析 20只乳兔全部進(jìn)入終結(jié)果分析，見(jiàn)圖1。 2.2 聚羥基乙酸支架材料掃描電鏡觀察 對(duì)聚羥基乙酸支架材料進(jìn)行掃描電鏡觀察，可以觀察到支架材料具有良好的孔隙結(jié)構(gòu)，見(jiàn)圖2。 2.3 乳兔軟骨細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果觀察 對(duì)乳兔軟骨細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，原代培養(yǎng)1 d，細(xì)胞開(kāi)始貼壁，呈短梭形、圓 形；培養(yǎng)3 d，細(xì)胞多呈三角形及多邊形，其胞漿豐富；培養(yǎng)10 d，可觀察到細(xì)胞胞漿豐富，細(xì)胞之間相互連接，并呈現(xiàn)出“鋪路石”狀，見(jiàn)圖3。 2.4 乳兔軟骨細(xì)胞培養(yǎng)體外生長(zhǎng)情況檢測(cè) 利用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀對(duì)細(xì)胞在492 nm處的吸光度值進(jìn)行檢測(cè)和記錄，按照檢測(cè)結(jié)果繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)，見(jiàn)圖4。 2.5 術(shù)后動(dòng)物一般情況分析 術(shù)后兩組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均正常呼吸，呼吸維持在良好的通暢狀態(tài)，未出現(xiàn)喘鳴等情況，正常進(jìn)食、飲水、活動(dòng)，術(shù)后頸部傷口均一期愈合，未出現(xiàn)感染或死亡。 2.6 標(biāo)本大體情況分析 植入后4周：實(shí)驗(yàn)組可觀察到軟骨缺損得到一定的修復(fù)，修復(fù)區(qū)域未出現(xiàn)壞死；對(duì)照組缺損區(qū)域填充有肌肉和結(jié)締組織。 植入后8周：實(shí)驗(yàn)組軟骨缺損得到進(jìn)一步修復(fù)，修復(fù)界限不明顯；對(duì)照組軟骨缺損未得到修復(fù)，與周?chē)＼浌侵g存在明顯界限。 2.7 兩組Ⅱ型膠原表達(dá)分析 實(shí)驗(yàn)組植入后4，8周的Ⅱ型膠原陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組(P均< 0.05)，見(jiàn)表1，圖5。 3 討論 Discussion 喉部較易出現(xiàn)軟骨缺損，其中喉甲狀軟骨缺損十分常見(jiàn)，但軟骨的修復(fù)能力十分有限[11-13]。國(guó)外學(xué)者Kim等[14]通過(guò)研究指出，對(duì)于直徑在3 mm以下的軟骨缺損，可實(shí)現(xiàn)全部或者部分修復(fù)。但對(duì)于直徑在4 mm以上的軟骨缺損，依靠機(jī)體自身的修復(fù)能力則大多無(wú)法自行修復(fù)。 在進(jìn)行軟骨修復(fù)時(shí)，采用自體軟骨移植是常用的方法，但受到來(lái)源和創(chuàng)傷等因素的影響，存在一定的應(yīng)用局限性[15-19]。隨著組織工程學(xué)的不斷發(fā)展，臨床開(kāi)始積極的通過(guò)構(gòu)建組織人工骨的方式進(jìn)行軟骨缺損修復(fù)治療[20-25]。鄭信民等[26]通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，利用具有良好活力的同種異體軟骨進(jìn)行軟骨修復(fù)治療可以獲得理想的臨床效果。在將同種異體軟骨植入人體之后，可以維持20年左右的存活時(shí)間且很少會(huì)出現(xiàn)明顯的吸收現(xiàn)象，臨床修復(fù)效果十分理想。Donald等[27]也采用異體軟骨移植的方式對(duì)不同類(lèi)型軟骨缺損進(jìn)行治療，并與自體軟骨缺損的臨床效果進(jìn)行比較。通過(guò)比較發(fā)現(xiàn)，兩種不同的軟骨移植方式在排斥率和感染率方面經(jīng)比較差異均無(wú)顯著性意義。但較之自體軟骨移植，異體軟骨移植存在明顯吸收現(xiàn)象。學(xué)者們還認(rèn)為，如果在臨床治療中利用良好的方法對(duì)異體軟骨予以妥善保存，則可顯著降低其移植后的吸收現(xiàn)象，達(dá)到與自體軟骨移植相同的治療效果。在采用組織工程人工骨進(jìn)行軟骨修復(fù)治療時(shí)，基本要素是種子細(xì)胞和支架材料。構(gòu)建過(guò)程中，需要用到一定的種子細(xì)胞[28-29]。軟骨內(nèi)無(wú)血管、淋巴管和神經(jīng)，細(xì)胞被包埋在由軟骨基質(zhì)形成的軟骨囊內(nèi)，因此軟骨細(xì)胞具有抗原性弱，不易被機(jī)體免疫系統(tǒng)攻擊的特點(diǎn)，而且作為種子細(xì)胞，在獲取過(guò)程中經(jīng)過(guò)酶的消化、傳代培養(yǎng)及與生物材料的復(fù)合培養(yǎng)等系列處理，細(xì)胞表面抗原可被進(jìn)一步消弱和包裹[30]。軟骨的這些免疫學(xué)優(yōu)勢(shì)使得同種異體軟骨細(xì)胞作為組織工程種子細(xì)胞成為可能。 此次實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，選擇具備免疫力的乳兔體內(nèi)獲得軟骨細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)所需的種子細(xì)胞。除種子細(xì)胞之外，在組織工程軟骨的構(gòu)建過(guò)程中，還需要使用相應(yīng)的支架材料。在軟骨組織工程生物材料研究中，人工合成和天然類(lèi)等多種材料都被嘗試用于組織工程化軟骨組織構(gòu)建，以形成片狀和無(wú)中空結(jié)構(gòu)的簡(jiǎn)單形態(tài)組織工程化軟骨為主，尚無(wú)適宜大塊中空形態(tài)軟骨組織構(gòu)建需求的生物材料，且普遍存在價(jià)格昂貴、加工工藝復(fù)雜等問(wèn)題。因此，繼續(xù)探索理想的軟骨組織工程生物支架材料研究仍是面臨的課題。理想的支架材料應(yīng)該具有耐拉伸、生物相容性良好、無(wú)致炎性、無(wú)排斥性和易降解等特點(diǎn)，可為種子細(xì)胞提供所需的支撐。本次實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，選擇使用的支架材料為聚羥基乙酸。聚羥基乙酸具有良好的生物降解性和生物相容性，有很好的吸附性、成膜性、通透性、成纖性、吸濕性，可作為支架材料，與軟骨細(xì)胞復(fù)合起來(lái)予以應(yīng)用[31-33]。將支架與軟骨細(xì)胞進(jìn)行復(fù)合并進(jìn)行軟骨缺損修復(fù)，植入動(dòng)物體內(nèi)一段時(shí)間之后，支架材料會(huì)逐漸發(fā)生降解[34-35]。本次實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)聚羥基乙酸支架材料進(jìn)行掃描電鏡觀察，可以觀察到聚羥基乙酸支架材料具有良好的孔隙結(jié)構(gòu)，說(shuō)明聚羥基乙酸具有良好的空間結(jié)構(gòu)，可為軟骨細(xì)胞的附著和黏附等提供良好的條件[36]。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行大體觀察可以發(fā)現(xiàn)，植入后4周，實(shí)驗(yàn)組可以觀察到軟骨缺損得到一定的修復(fù)，修復(fù)區(qū)域未出現(xiàn)壞死，對(duì)照組缺損區(qū)域填充有肌肉和結(jié)締組織；植入后8周，實(shí)驗(yàn)組軟骨缺損得到進(jìn)一步修復(fù)，且修復(fù)界限不明顯，對(duì)照組軟骨缺損未得到修復(fù)，與周?chē)＼浌侵g存在明顯的界限。結(jié)果顯示，使用同種異體軟骨細(xì)胞-聚羥基乙酸復(fù)合物對(duì)存在免疫力的乳兔進(jìn)行喉甲狀軟骨缺損修復(fù)，可以獲得良好的軟骨修復(fù)效果。Ⅱ型膠原由軟骨細(xì)胞分泌，是軟骨的主要膠原成分之一[37-39]。Ⅱ型膠原的表達(dá)可反映出機(jī)體內(nèi)軟骨細(xì)胞的生長(zhǎng)情況[40-51]。此次實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中富含豐富的Ⅱ型膠原，表明軟骨細(xì)胞大量增殖，顯著高于對(duì)照組(P < 0.05)，即提示，利用同種異體軟骨細(xì)胞-聚羥基乙酸復(fù)合物對(duì)存在免疫力的乳兔喉甲狀軟骨缺損進(jìn)行修復(fù)，可獲得理想的治療效果。 作者貢獻(xiàn)：?jiǎn)陶记暹M(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，實(shí)驗(yàn)實(shí)施為喬占清、張俊、馬賽、喬新明，實(shí)驗(yàn)評(píng)估為喬占清、馬振亞，資料收集為司遠(yuǎn)征，喬占清成文，喬占清、喬新明審校。 利益沖突：所有作者共同認(rèn)可文章無(wú)相關(guān)利益沖突。 倫理問(wèn)題：實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校*附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理部分審核并批準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)動(dòng)物的使用和處理方法及動(dòng)物福利等問(wèn)題均符合倫理要求。 文章查重：文章出版前已經(jīng)過(guò)CNKI反剽竊文獻(xiàn)檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行3次查重。 文章外審：本刊實(shí)行雙盲外審制度，文章經(jīng)國(guó)內(nèi)小同行外審專(zhuān)家審核，符合本刊發(fā)稿宗旨。 作者聲明：文章*作者對(duì)研究和撰寫(xiě)的論文中出現(xiàn)的不端行為承擔(dān)責(zé)任。論文中涉及的原始圖片、數(shù)據(jù)(包括計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)庫(kù))記錄及樣本已按照有關(guān)規(guī)定保存、分享和銷(xiāo)毀，可接受核查。 文章版權(quán)：文章出版前雜志已與全體作者授權(quán)人簽署了版權(quán)相關(guān)協(xié)議。 4 參考文獻(xiàn) References [1]孫安科,陳文弦,崔鵬程,等.同種異體工程化軟骨的構(gòu)建和修復(fù)甲狀軟骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[J].中華耳鼻咽喉科雜志, 2001,36(4):278-280. 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