MTT
主要用途
MTT比色法細胞繁殖定量檢測試劑是一種旨在通過活細胞線粒體中的脫氫酶還原二甲基噻唑二苯基四唑嗅藍（MTT）成藍紫色的不溶性甲瓚顆粒，作為檢測信號來比色定量測定活體細胞繁殖的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。適用于各種生長中的真核生物細胞。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，性能長期穩(wěn)定，著色清晰。
技術(shù)背景
作為細胞染色劑之一的二甲基噻唑二苯基四唑嗅藍（3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide；MTT），簡稱噻唑鹽染料，可以自由地進入活細胞中。細胞繁殖快，其代謝旺盛，線粒體琥珀酸脫氫酶的活性增強，從而還原細胞漿中的淡黃色外源性染料為不溶性、藍紫色結(jié)晶產(chǎn)物而留存在細胞內(nèi)，使用特定有機化物質(zhì)溶解結(jié)晶顆粒而呈現(xiàn)出顏色深淺，在570nm波長下產(chǎn)生吸收峰：吸光值與細胞量成線性正相關(guān)，反映細胞活力。
產(chǎn)品內(nèi)容
毫升
毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，避免光照，有效保證6月
用戶自備
酶標儀：用于定量檢測染色細胞
移液排槍：用于同步加入染色試劑
實驗步驟
實驗開始前，將 ℃冰箱里的試劑盒放在室溫下融化,置于暗室里。然后進行下列操作。
一、貼壁細胞檢測
1． 從細胞培養(yǎng)箱里取出待測的 孔細胞培養(yǎng)板
2． 確保 孔板中每一個孔含有 微升細胞培養(yǎng)液
3． 小心加入 微升到 孔板中每一個孔里
4． 放進 ℃培養(yǎng)箱里，孵育 小時（可見紫色結(jié)晶沉淀）
5． 小心抽去每孔中含有的培養(yǎng)液（注意：確保培養(yǎng)孔中無任何液體殘留） 1
比色法細胞繁殖定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
染色液（Reagent A）
溶解液（Reagent B）
染色液(Reagent A)
染色液(Reagent A)
6． 小心加入 微升到 孔板中每一個孔里
7． 放進37℃培養(yǎng)箱里，孵育 分鐘
8． 輕輕搖動 孔板，使其混勻
9． 即刻放進酶標儀測讀：波長 nm
10．繪制細胞生長曲線：縱座標（Y軸）為吸光值（OD）；橫坐標（X軸）為細胞數(shù)
二、 懸浮細胞檢測
1． 從細胞培養(yǎng)箱里取出待測的 孔細胞培養(yǎng)板
2． 確保 孔板中每一個孔含有 微升細胞培養(yǎng)液
3． 小心加入 微升到 孔板中每一個孔里
4． 放進 ℃培養(yǎng)箱里，孵育 小時（可見紫色結(jié)晶沉淀）
5． 放進孔板離心機離心 分鐘，速度為 g
6． 小心抽去每孔中含有的培養(yǎng)液（注意：確保培養(yǎng)孔中無任何液體殘留）
7． 小心加入 微升到 孔板中每一個孔里
8． 放進 ℃培養(yǎng)箱里，孵育 小時
9． 輕輕搖動 孔板，使其混勻
10．即刻放進酶標儀測讀：波長 nm
11．繪制細胞生長曲線：縱座標（Y軸）為吸光值（OD）；橫坐標（X軸）為細胞數(shù)
注意事項
1． 本產(chǎn)品為500次（5個96孔細胞培養(yǎng)板）操作
2． 操作時須戴手套
3． 整個操作須無菌操作
4． 建議96孔板里的細胞量在1000至100000范圍為理想狀態(tài)
5． 孵育時，須避光
6． 建議使用無細胞空對照作為背景讀數(shù)，通常吸光值為0.1
7． 懸浮細胞（例如血白細胞等）需使用孔板離心，確保理想效果
8． 如果懸浮細胞不采取離心，建議懸浮細胞檢測中的實驗步驟8延長孵育時間到2小時或更長
9． 如果酶標儀測讀的讀數(shù)過低，可以繼續(xù)延長的孵育時間到24小時
10．如果沒有570nm的酶標儀，可以使用550至600nm波長范圍的濾波器替代
11．可以使用其它培養(yǎng)板檢測，相應(yīng)調(diào)整的用量，培養(yǎng)液和染色液的用量之比為10：1
12．本公司提供系列細胞繁殖和毒性檢測試劑盒
質(zhì)量標準
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能長期穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定著色清晰
溶解液(Reagent B)
染色液(Reagent A)
染色液(Reagent A)
溶解液(Reagent B)
溶解液(Reagent B)
染色液(Reagent A)