植物細胞內氧化應激活性氧超氧陰離子紅色熒光測定試劑盒 | ||||||||||||||||||||||||||||||
點擊次數:1506 更新時間:2017-01-18 | ||||||||||||||||||||||||||||||
植物細胞內氧化應激活性氧超氧陰離子紅色熒光測定試劑盒 產品說明書
主要用途
植物細胞內氧化應激活性氧超氧陰離子紅色熒光測定試劑是一種旨在通過透膜熒光染色劑二氫溴化乙啶,在細胞氧化條件下,產生紅色熒光,來檢測細胞內超氧陰離子活性氧族的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種其適用于新鮮植物組織(例如根尖、葉片等)和培養(yǎng)細胞等細胞內氧化應激活性氧的分析。可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、衰老和代謝等的研究。產品嚴格無菌,即到即用,操作簡易,活體檢測,性能穩(wěn)定,滯留持久,熒光清晰。
技術背景
超氧自由基陰離子(superoxide radical;O2-)、過氧化氫(hydrogen peroxide;H2O2)、羥自由基或氫氧基(hydroxyl radical;OH-)、過氧化基(peroxyl radical;ROO-)、氫過氧自由基(hydroperoxyl;HOO)、烷氧自由基(alcoxyl radical)、氮氧基(nitric Oxide;NO-)、過氧亞硝基陰離子(peroxynitrite anion;ONOO-)次氯酸(hypochlorous acid;HOCl)、半醌自由基(semiquinone radical)、單線態(tài)氧氣(singlet oxygen)等細胞內活性氧族(Reactive Oxygen Species;ROS)的產生和增多,將導致細胞衰老或凋亡。二氫溴化乙啶(Dihydroethidium bromide;Hydroethidine;DHE)是一種*自由通過細胞膜,并在細胞內長期滯留而不外漏的染色劑。一旦被超氧自由基陰離子氧化,二氫溴化乙啶轉化為溴化乙啶,進入細胞核,與DNA緊密結合,便產生熒光。據此證明細胞內超氧陰離子活性氧族的存在。
產品內容
保存方式
保存染色液(Reagent D)在-20℃冰箱里,避免光照;其余的保存在4℃冰箱里;固著液(Reagent B)和離析液(Reagent C)具有腐蝕性,注意操作安全;有效保證6月
用戶自備
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液:用于細胞脫離 *細胞培養(yǎng)液:用于細胞操作所需的培養(yǎng)基 15毫升錐形離心管:用于細胞操作的容器 1.5毫升離心管:用于染色液配制的容器 載玻片:用于組織染色操作 解剖針:用于植物組織解剖 血細胞計數儀:用于細胞計數 (微型)臺式離心機:用于樣品處理 培養(yǎng)箱:用于染色孵育 比色皿或酶標板:用于熒光定量分析的容器 (共聚焦)熒光顯微鏡:用于熒光分析 細胞流式儀:用于用于細胞染色分析 熒光分光光度儀或熒光酶標儀:用于熒光定量分析
實驗步驟
方法一:活體組織染色
方法二:組織固定染色
方法三、培養(yǎng)植物細胞脫離染色
波峰右移,表明超氧陰離子含量高
1)移取10微升上述細胞懸液到載波片上,蓋上蓋玻片 2)激發(fā)波長540nm,散發(fā)波長590nm―― 紅色熒光增強,表明超氧陰離子含量高
1)移取400微升上述細胞懸液到1毫升比色皿 2)加入xx微升清理液(Reagent A) 3)上下傾倒混勻數次 4)放進熒光分光光度儀:激發(fā)波長540nm,散發(fā)波長590nm―― RFU增高,表明超氧陰離子含量高
方法四、貼壁培養(yǎng)細胞染色
(注意:可以使用載玻片,載玻片培養(yǎng)皿,35mm培養(yǎng)皿,和其它培養(yǎng)孔板,見注意事項4)
(A)使用倒置熒光顯微鏡觀察(定性檢測): 激發(fā)波長540nm,散發(fā)波長590nm――紅色熒光增強,表明超氧陰離子含量高
放進熒光分光光度儀或熒光酶標儀:激發(fā)波長540nm,散發(fā)波長590nm――RFU增高,表明超氧陰離子含量高
注意事項
質量標準
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