細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶檢測試劑盒 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
點(diǎn)擊次數(shù):982 更新時(shí)間:2017-01-18 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶檢測試劑盒 產(chǎn)品說明書
主要用途
細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶檢測試劑是一種旨在以X-Gal為底物,通過細(xì)胞內(nèi)β-半乳糖苷酶在酸性條件下穩(wěn)定表達(dá),催化生成深藍(lán)色的沉積產(chǎn)物,從而在光學(xué)顯微鏡下觀察到藍(lán)色表達(dá)的細(xì)胞作為細(xì)胞復(fù)制性衰老(replicative senescence)的分子特征來識(shí)別和探測衰老細(xì)胞的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究。其適用于各種人體和動(dòng)物細(xì)胞或活體內(nèi)(in vivo)檢測。產(chǎn)品即到即用,性能穩(wěn)定,參數(shù)優(yōu)化,著色敏感,堪稱上同類產(chǎn)品佳。
技術(shù)背景
細(xì)胞復(fù)制性衰老是細(xì)胞控制其生長潛能的保障機(jī)制。衰老細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期的G1期,表現(xiàn)出細(xì)胞扁平、脹大、顆粒增多的形態(tài)特征,尤其在酸性條件下,細(xì)胞內(nèi)β-半乳糖苷酶活性增加,而成為細(xì)胞衰老的生物學(xué)標(biāo)記。
產(chǎn)品內(nèi)容
保存方式
保存 染色液(Reagent E)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里; 稀釋液(Reagent D)和 染色液(Reagent E)用鋁箔封裹,避免光照;有效保證6月
用戶自備
2毫升離心管:用于配制染色工作液 15毫升錐形離心管:用于配制染色工作液 恒溫培養(yǎng)箱:用于染色孵育 光學(xué)顯微鏡:用于觀察染色后的細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)步驟
操作一、25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶染色
實(shí)驗(yàn)開始前,將試劑盒里的 染色液(Reagent E)從-20℃的冰箱里取出,放進(jìn)冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升 稀釋液(Reagent D)到2毫升離心管,加入xx微升 染色液(Reagent E),混勻后,放進(jìn)37℃恒溫水槽里預(yù)熱,標(biāo)記為 染色工作液。然后進(jìn)行下列操作:
操作二、24孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色
實(shí)驗(yàn)開始前,將試劑盒里的 染色液(Reagent E)從-20℃的冰箱里取出,放進(jìn)冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升 稀釋液(Reagent D)到15毫升錐形離心管,加入xx微升 染色液(Reagent E),混勻后,放進(jìn)37℃恒溫水槽里預(yù)熱,標(biāo)記為 染色工作液。然后進(jìn)行下列操作。
1.小心抽去24孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液 2.每孔加入xx微升 清理液(Reagent A),清洗生長中的細(xì)胞表面 3.小心抽去每孔里的清理液 4.每孔加入xx微升 固定液(Reagent B),覆蓋整個(gè)生長表面 5.在室溫下孵育5分鐘 6.小心抽去固定液 7.每孔加入xx微升 酸性液(Reagent C),清洗細(xì)胞表面 8.小心抽去酸性液 9.重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟7和8一次 10.每孔加入xx微升 染色工作液,覆蓋整個(gè)細(xì)胞表面 11.放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱,孵育3小時(shí)至16小時(shí),或細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色(注意:避免液體蒸發(fā)) 12.在光學(xué)顯微鏡下觀察和計(jì)數(shù):表達(dá)衰老特異性β- 半乳糖苷酶的細(xì)胞為陽性細(xì)胞,呈現(xiàn)藍(lán)色
注意事項(xiàng)
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
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