細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)鈣離子濃度熒光檢測試劑盒 |
點擊次數(shù):4068 更新時間:2017-01-17 |
HL10267.1 細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)鈣離子濃度熒光檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
主要用途
細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)鈣離子濃度熒光檢測試劑是一種旨在通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子特異性熒光探針Mag-Fluo-AM,與鈣離子結(jié)合后,其熒光強度顯著增強,在熒光分光光度儀下觀察相對熒光峰值的變化,來測定內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中總鈣離子濃度的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種活體細胞(動物、人體等)內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子的濃度檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,檢測敏感。
技術(shù)背景
鈣是人體中的一種重要電介質(zhì)和礦物質(zhì),占1150克。其中99%的鈣以氟磷灰石鈣(calcium fluorophosphate apatite)形式存在于骨組織中。非骨組織鈣成分主要存在于細胞內(nèi)。鈣具有兩種主要形式:一種是非彌散型蛋白結(jié)合鈣,其構(gòu)成約40%至50%的血清中的總鈣含量;另一種為彌散型游離鈣,其進一步分成具有活性的復(fù)合鈣(complexed calcium)和離子鈣(ionized calcium)。鈣對神經(jīng)肌肉興奮性(neuromuscular excitability)、血液凝固、酶的激活、離子跨膜運輸、釋放神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)、信使傳導(dǎo)等方面起著重要作用。在細胞內(nèi),鈣離子主要儲存在線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細胞器中。其中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子儲存在控制細胞活化、調(diào)控信號通路、蛋白分子轉(zhuǎn)錄后修飾,維持細胞內(nèi)環(huán)境鈣離子平衡方面起著重要作用。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣的檢測包括沉淀法、EDTA鰲合滴定法、火焰光度法(flame photometry)、原子吸收分光光度法等技術(shù),但容易受到鈉、鉀、磷酸鹽、硫酸鹽的干擾,或者受限于儀器的特殊的要求,以及需要內(nèi)質(zhì)網(wǎng)純化。Mag-Fluo-AM染料是一種鈣離子低親和性的熒光標(biāo)記染料,特異性地由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)捕獲,可以檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)的游離鈣離子濃度的變化。在熒光分光光度儀下,激發(fā)波長490nm,散發(fā)波長525nm,來定量測定內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的鈣濃度。
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液(Reagent A) 40毫升 染色液(Reagent B) 30微升 介導(dǎo)液(Reagent C) 600微升 通透液(Reagent D) 120微升 飽和液(Reagent E) 2毫升 陰性液(Reagent F) 2毫升 產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存清理液(Reagent A)、 染色液(Reagent B)、介導(dǎo)液(Reagent C)和通透液(Reagent D)在-20℃冰箱里,避免光照;其余的保存在4℃冰箱里,有效保證6月
用戶自備
1.5毫升離心管:用于工作液配制的容器 細胞培養(yǎng)箱:用于染色孵育 黑色96孔培養(yǎng)板:用于樣品操作的容器 熒光酶標(biāo)儀:用于熒光分析 (共聚焦)熒光顯微鏡:用于熒光染色觀察
實驗步驟
二、熒光酶標(biāo)儀檢測
【(樣品RFU-空白對照孔RFU)÷(大對照孔RFU-樣品RFU)】X 22(微摩爾;解離常數(shù))
三、(共聚焦)或熒光顯微鏡檢測
1. 準(zhǔn)備1個待測的細胞爬片樣品
注意事項
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
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