過氧化物酶(pod)測試方法 |
點擊次數(shù):2191 更新時間:2016-10-26 |
過氧化物酶(pod)測試原理: 過氧化物酶催化過氧化氫氧化酚類的反響,產(chǎn)品為醌類化合物,此化合物進一步縮合或與別的分子 縮合,發(fā)生顏色較深的化合物。本試驗以鄰甲氧基苯酚(即愈創(chuàng)木酚)為過氧化物酶的底物,在此 酶存鄙人,H2O2可將鄰甲氧基苯酚氧化成紅棕色的4-鄰甲氧基苯酚紅棕色的物質(zhì)可用分光光度計在470nm處測定其消光值,即可求出該酶的活性。 試驗準備: 儀器:分光光度計、離心機、秒表、天平、研缽、磁力攪拌器 試劑:愈創(chuàng)木酚、30%H2O2、0.2mol/L磷酸緩沖液(7.8)、0.1mol/L磷酸緩沖溶液(PH6.0,見附錄) 反應(yīng)混合液[100mmol/L磷酸緩沖溶液(PH6.0)50ml,參加愈創(chuàng)木酚28μl,于磁力攪拌器上加熱攪 拌,直至愈創(chuàng)木酚溶解、待溶液冷卻后,參加(待溶液冷卻后再參加,不然導(dǎo)致分解)30%H2O2 19μl,混合均勻,保留于冰箱中。 實踐的構(gòu)成和裝備: 試劑一:液體60ml×4瓶,4℃保留6個月 試劑二:粉劑×3瓶,4℃保留6個月 試劑二使用液的裝備:臨用每瓶粉劑參加10ml的雙蒸水溶解,4℃避光保留 試劑三:液體5ml1瓶,4℃保留6個月 試劑三使用液的制造:臨用前用雙蒸水15倍稀釋,使得1cm光徑,雙蒸水調(diào)零時A240保持在0.4擺布,現(xiàn)用現(xiàn)配。若A值太高,則加雙蒸水稀釋,若A值太低,則參加適量試劑三。(通常在25倍擺布稀釋) 試劑四:液體50ml×2瓶,4℃保留6個月。 說明書: (1)檢查的成果沒有吸光度值或吸光度值很低
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